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薄層色譜的操作方法

2019年11月28日 11:02

　　【儀器網使用手冊】薄層色譜是一種較新的色譜法，兼具柱色譜和紙色譜的優點，能快速分離和定性分析少量物質。薄層色譜性能優異，操作也較簡單。

　　1.選擇吸附劑

　　吸附劑一般要求直徑為10～40μm，需要根據被分離物質的性質選擇，常用的吸附劑有以下幾種。

　　硅膠：微酸性極性固定相，適用于酸性、中性物質分離

　　氧化鋁：堿性極性固定相，適用于堿性、中性物質分離

　　纖維素：含有羥基的極性固定相，適用于分類親水性物質。

　　聚酰胺：含有酰胺基極性固定相，適用于酚類、醇類化合物的分離。

　　2.制備薄層板

　　薄層板的質量將決定分離的效果，應該盡量均勻且厚薄一致。薄層板的制備主要有兩種方法：

　　①將潔凈干燥的玻璃板置于鋪板器中間，在鋪板槽中倒入糊狀物，自左向右推，將糊狀物均勻地涂在玻璃板上。

　　②將調成糊狀物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙鋪平并用手捏住玻璃板一角，輕輕碰敲桌面，使薄層表面均勻并除去糊狀物中的氣泡。

　　制備完成后還需要將涂好的薄層板水平放置于室溫下晾干，然后放在烘箱內加熱活化。(硅膠板需在烘箱內慢慢升溫至105-110度后保溫30分鐘；氧化鋁板需在200-220度烘4小時)

　　3.點樣

　　將待測樣品溶在極性盡可能低的溶劑中配成1%的溶液。用一支平口的細毛細管蘸取少量樣品溶液點在薄板上。

　　4.展開

　　薄層層析有多種展開方式，可分為上行、下行、雙向展開等，這里介紹一下上行法和下行法。

　　上行法：在缸中加入足夠量的展開劑，將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，密封缸蓋，待展開前沿離薄板上端1cm時，取出薄層板，并用鉛筆輕輕畫下溶劑前沿，晾干。

　　下行法：在展開缸的蓋子上裝一個小鉤，將展開的紙片鉤住，并通過一濾紙條將展開劑和紙片連起來。待展開劑前沿離紙片下端 1cm時，取出紙片，并用鉛筆輕輕畫下溶劑前沿，晾干。

　　5.顯色

　　晾干薄板溶劑后對板上的組分進行定位。將顯色劑以噴霧方式直接噴到薄層板上可顯示不同顏色的斑點。此外對于無色樣品，可采用帶熒光劑的吸附劑做薄板，展開后在紫外光下顯暗色斑點；對于在光學條件下不顯色的物質，可將薄板置于含有少量碘晶體的密閉容器中，與碘作用呈棕色斑點。

　　6.Rf值計算

　　用尺測量原點到色斑中心的距離除以原點到溶劑前沿的距離。不同的物質往往有著不同的Rf值，根據這個就可以簡單判斷它們是否是同一物質，但Rf值相同之后，還要進行進一步判斷才能確定他們是否為同一個物質。

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