【儀器網 島津】導語:古語云“阿膠一碗,芝麻一盞,白米紅餡蜜餞。粉腮似羞,杏花春雨帶笑看。潤了青春,保了天年,有了本錢”。阿膠能補血滋陰、潤燥止血,自古為滋補上品。
阿膠系驢皮經煎煮濃縮成的固體膠。近年來,隨著驢皮貨源緊缺,市面上存在不法商販弄虛作假,以次充好,以牛皮、馬皮等下腳料冒充驢皮制作假冒偽劣阿膠的行徑,嚴重擾亂了阿膠市場。其他獸畜皮熬膠,也有補血止血的功能,但阿膠偽品的蛋白質成分及其含量和阿膠真品存在明顯不同,與驢皮膠使用效果相差甚遠。因此,掌握阿膠的真偽鑒別方法至關重要。
為了進一步規范阿膠產業發展,提升阿膠品質保障能力,國家藥典委在2019年發布關于“關于阿膠、海龍、海馬等國家藥品標準修訂草案的公示”和“關于阿膠國家藥品標準修訂草案的公示(第二次)”兩項公示稿,分別對阿膠【含量測定】和阿膠【鑒別】項下內容進行了修訂。其中阿膠【含量測定】項修訂幅度大,新增了“特征多肽”含量要求:
驢源多肽A1特征
離子對:m/z469.25>712.30和m/z z469.25>783.40,
驢源多肽A2特征離子對:m/z618.35> 779.40和m/z618.35> 850.40,
按干燥品計算,“含特征多肽以驢源多肽A1(C41H68N12O13)和驢源多肽A2(C51H82N18O18)的總量計應不得少于0.17%”。
此外,在2012年藥典委頒布了《阿膠中牛皮源質量的補充檢驗方法》。2015版《中國藥典》中,明確規定使用
液相色譜-串聯
質譜法用于阿膠、龜甲膠、鹿角膠的鑒別。近,國家藥監局還頒布了《阿膠中豬皮源的補充檢驗方法》,在阿膠產品中應不得檢出豬皮源(新阿膠)成分。
島津參考以上標準和文獻報道,使用胰蛋白酶對阿膠、牛皮膠和豬皮膠等不同來源的明膠類物質進行酶切處理,通過島津LCMS-8045液相色譜質譜聯用儀(圖1)對特征多肽進行測定,從而實現阿膠與雜皮膠的鑒別與阿膠的定量。
圖 1 島津 LCMS-8045液相色譜質譜聯用儀
主要方法參數
色譜柱:
Shim-pack GIST (2.1 mm I.D.×100 mm L., 2.0 μm)
MRM參數:見表1
表1 MRM優化參數
對照藥材分析
采用超高效液相色譜-質譜聯用的方法,一次進樣,同時分析8種特征多肽,實現阿膠藥材的鑒別與定量。分析結果表明,阿膠、驢源多肽A1、驢源多肽A2、黃明膠、鹿角膠、龜甲膠、新阿膠、馬皮源多肽信噪比均大于10:1,完全滿足檢測要求。如下圖2(左右滑動查看全部內容)
圖2 阿膠等8種特征肽定性色譜圖
樣品測定
對阿膠樣品進行測定,黃明膠、鹿角膠、龜甲膠、新阿膠、馬皮源通道均未檢出;阿膠、驢源多肽A1、驢源多肽A2分離良好,峰形對稱,且信噪比均大于10:1。如下圖3(左右滑動查看全部內容)
圖3 阿膠定性定量肽段測量
總結
阿膠作為滋補佳品,消費者平時關注更多的是阿膠的功效。其實,無數“實驗猿”為了保證阿膠的真實與有效,默默地完成了大量阿膠藥材真偽鑒別與含量測定的工作。有了本文的方法,“實驗猿”可以一針進樣鑒別多種肽段,節省時間。除此之外,本方法加入了定量肽段,可以實現定性定量同時分析。
“暗服阿膠不肯道,卻說生來為君容”。更多關于阿膠的文章,參閱島津推出《膠類藥材定性鑒別解決方案》。
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